F1ANNEX I
F11.DETERMINATION OF STARCHPOLARIMETRIC METHOD
F11.Purpose and scope
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F12.Principle
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F13.Reagents
F13.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F13.3.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.4.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.5.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Apparatus
F14.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Procedure
F15.1.Preparation of the sample
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.2.Determination of the total optical rotation (P or S) (see observation 7.1)
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F15.3.Determination of the optical rotation (P' or S') of substances soluble in 40 % ethanol
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F16.Calculation of results
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F16.1.Measurement by polarimeter
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F16.2.Measurement by saccharimeter
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.3.Repeatability
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.Observations
F17.1.
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F17.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.3.Following feed materials, in case they are present in significant amount in feedingstuffs, are known to give rise to interferences when determining the starch content by polarimetric method and whereby incorrect results could be yielded:
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F12.DETERMINATION OF CRUDE PROTEIN
F11.Purpose and scope
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F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Reagents
F13.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.9
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.10
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.11
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F13.12
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F13.13
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F14.Apparatus
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F15.Procedure
F15.1Digestion
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F15.2Distillation
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F15.3Titration
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F15.4Blank test
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F16.Calculation of results
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F17.Verification of the method
F17.1Repeatability
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F17.2Accuracy
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F18.Observations
F18.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F18.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F18.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.DETERMINATION OF CRUDE PROTEIN DISSOLVED BY PEPSIN AND HYDROCHLORIC ACID
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Reagents
F13.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Apparatus
F14.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Procedure
F15.1Preparation of solution (see observation 7.2)
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.2Digestion
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.3Distillation and titration
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F15.4Blank test
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F16.Calculation of results
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Repeatability
F17.Observations
F17.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.2
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F14.ESTIMATION OF PEPSIN ACTIVITY
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F13.Reagents
F13.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Apparatus
F14.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Procedure
F15.1Preparation of the solution (see observation 7.1)
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.2Hydrolysis
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F15.3Development of coloration and measurement of optical density
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.4Blank test
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F15.5Calibration curve
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F16.Calculation of results
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F17.Observations
F17.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F15.DETERMINATION OF FREE AND GOSSYPOL
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Reagents
F13.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Apparatus
F14.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Procedure
F15.1Test sample
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.2Determination of free gossypol
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F15.3Determination of total gossypol
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F16.Calculation of results
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F16.1From the specific optical density
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.2From a calibration curve
F16.2.1Free gossypol
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F16.2.2Total gossypol
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F16.3Repeatability
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F1ANNEX II
F11.DETECTION AND IDENTIFICATION OF ANTIBIOTICS OF THE TETRACYCLINE GROUP
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Reagents and culture medium
F13.1Buffer solution, pH 3.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2Phosphate buffer solution, pH 5.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.9Micro-organism: B. cereus ATCC No 11.778
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.10Culture medium
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.11
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Apparatus
F14.1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Standard solutions
F15.1Stock solutions
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.2Reference solutions for detections by UV light
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.3Reference solutions for detection by bioautography
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.Extraction
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.Detection and identification
F17.1Chromatography
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F17.2Detection by UV light
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.3Detection by bioautography
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.4Identification
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.DETERMINATION OF CHLORTETRACYCLINE, OXYTETRACYCLINE AND TETRACYCLINE
F1A.BY DIFFUSION ON AGAR
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Micro-organism: B. cereus, ATCC No 11.778
F13.1Maintenance of the parent strain
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2Preparation of the spore suspension
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Culture media and reagents
F14.1Basic medium for the determination
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2Phosphate buffer solution, pH 5·5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.4Phosphate buffer solution, pH 8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.9
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.10
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.11
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Standard solutions
F15.1Chlortetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.2Oxytetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.3Tetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.Extraction
F16.1Contents of 50 ppm or less
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.2Contents greater than 50 ppm
F16.2.1Chlortetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.2.2Oxytetracycline and tetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.Determination method
F17.1Inoculation of the culture medium
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.2Preparation of the trays
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.3Incubation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F18.Evaluation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F19.Repeatability
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1B.BY TURBIDIMETRY
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Micro-organism: Staphylococcus aureus K 141
F13.1Maintenance of the parent strain
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2Preparation of the inoculum
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Culture media and reagents
F14.1Basic medium for the determination
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2Phosphate buffer solution, pH 4·5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Standard solution
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.Extraction
F16.1Chlortetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.2Oxytetracycline and tetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.Determination method
F17.1Preparation of the standard series and of the extract
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.1.1Chlortetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.1.2Oxytetracycline and tetracycline
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.2Inoculation of the culture medium
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.3Seeding
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.4Incubation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.5Measurement of growth
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F18.Calculation of results
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F19.Repeatability
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.DETERMINATION OF OLEANDOMYCIN— by diffusion on agar —
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Micro-organism: B. cereus K 250 TR (resistant to tetracyclines)
F13.1Maintenance of the parent strain
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2Preparation of the spore suspension
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Culture media and reagents
F14.1Medium for maintenance of the parent strain
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2Basic medium for the determination
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.7Extraction solution
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Standard solution
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.Extraction
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.Determination method
F17.1Inoculation of the culture medium
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.2Preparation of the trays
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.3Incubation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F18.Evaluation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F19.Repeatability
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.DETERMINATION OF TYLOSIN— by diffusion on agar —
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Micro-organism: Sarcina lutea ATCC No 9341
F13.1Maintenance of the parent strain
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2Preparation of the bacteria suspension
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F14.Culture media and reagents
F14.1Basic medium for the determination
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2Phosphate buffer solution, pH 8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.3Phosphate buffer solution, pH 7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Standard solutions
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F16.Extraction
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F17.Determination method
F17.1Inoculation of the culture medium
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.2Preparation of the trays
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F17.3Incubation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F18.Evaluation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F19.Repeatability
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.DETERMINATION OF VIRGINIAMYCIN— by diffusion in an agar medium —
F11.Purpose and scope
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.Principle
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.Micro-organism: Micrococcus luteus ATCC 9341 (NCTC 8340, NCIB 8553)
F13.1.Maintenance of stock culture
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2.Preparation of the bacterial suspension
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.Culture media and reagents
F14.1.Culture and assay medium
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.2.Phosphate buffer, pH 6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.3.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.4.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.5.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.6.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F14.7.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F15.Standard solutions
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F16.Preparation of the extract and assay solutions
F16.1.Extraction
F16.1.1.Products with a virginiamycin content up to 100 mg/kg
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.1.2.Products with a virginiamycin content greater than 100 mg/kg
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F16.2.Assay solutions
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.Assay procedure
F17.1.Inoculation of the assay medium
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.2.Preparation of the plates
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F17.3.Incubation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F18.Evaluation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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F19.Repeatability
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Repealed by Commission Regulation (EC) No 152/2009 of 27 January 2009 laying down the methods of sampling and analysis for the official control of feed (Text with EEA relevance).