F2ANNEX VF2F1DETERMINATION OF THE COMPOSITION AND CONTENT OF STEROLS AND TRITERPENES DIALCOHOLS BY CAPILLARY-COLUMN GAS CHROMATOGRAPHY
F21.SCOPE
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F22.PRINCIPLE
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F23.APPARATUS
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F24.REAGENTS
F24.1.
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F24.2.Potassium hydroxide ethanolic solution, approximately 2 N.
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F24.3.
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F24.4.Potassium hydroxide ethanolic solution, approximately 0,2 N.
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F24.5.
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F24.6.
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F24.7.
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F24.8.
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F24.9.
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F24.10.
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F24.11.
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F24.12.
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F24.13.
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F24.14.
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F24.15.
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F24.16.
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F24.17.
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F24.18.Sample solutions of sterol trimethylsilyl ethers.
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F24.19.
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F24.20.
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F24.21.
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F24.22.
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F24.23.
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F24.24.
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F24.25.
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F25.PROCEDURE
F25.1.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F25.1.1.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2Note 1:
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F25.1.2.
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F25.1.3.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2. . . . .
F25.1.4.
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F25.1.5.
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F25.2.Separation of the sterol and triterpene dialcohols fraction (erythrodiol + uvaol)
F25.2.1.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2Note 3:
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F25.2.2.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2Note 4:
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F25.2.3.
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F25.2.4.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2. . . . .
F25.2.5.
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F25.2.6.
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F25.3.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F25.3.1.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2Note 6:
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F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F25.3.2.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2Note 7:
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F25.4.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F25.4.1.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F25.4.1.1.Fit the column (point 3.11) in the gas chromatograph, by attaching the inlet end to the split injector and the outlet end to the detector.
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F25.4.1.2.If the column is being used for the first time, it is recommended that it be subjected to conditioning: passing a gentle flow of gas through the column itself, then switch on the gas chromatography unit and begin a gradual heating, up to a temperature of at least 20 °C above the operating temperature (Note 8). Hold this temperature for at least two hours, then place the entire unit in operating mode (adjustment of gas flows and splitting, ignition of the flame, connection with the computing system, adjustment of the column, detector and injector temperature, etc.) and then record the signal with a sensitivity at least two times greater than that one intended for the analysis. The course of the base line must be linear, without peaks of any kind, and must not show drift.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F2Note 8:
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F25.4.2.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F25.4.2.1.The operating conditions are as follows:
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F25.4.3.Analytical procedure
F25.4.3.1.By using the 10 μl microsyringe, take 1 μl of hexane, draw in 0,5 μl of air and then 0,5 to 1 μl of the sample solution. Raise the plunger of the syringe further, so the needle is emptied. Push the needle through the membrane of the injector and after one to two seconds, inject rapidly, and then slowly remove the needle after around five seconds.
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F25.4.3.2.
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F25.4.4.Peak identification
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F25.4.5.
F2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F25.4.5.1.
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F25.4.5.2.Calculate the concentration of each individual sterol, in mg/kg of fatty material, as follows:
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F26.EXPRESSION OF THE RESULTS
F26.1.Report individual sterol concentrations as mg/kg of fatty material and their sum as ‘total sterols’.
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F26.2.Calculate the percentage of each individual sterol from the ratio of the relevant peak area to the total peak area for sterols:
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F26.3.
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F26.4.Calculate the percentage of erythrodiol and uvaol:
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Deleted by Commission Implementing Regulation (EU) 2019/1604 of 27 September 2019 amending Regulation (EEC) No 2568/91 on the characteristics of olive oil and olive-residue oil and on the relevant methods of analysis.